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化學發光法測尿微量白蛋白對人ELISA試劑盒與臨床評價
更新時間:2013-12-09   點擊次數:1550次

人ELISA試劑盒尿微量白蛋白(MAU)是指尿中白蛋白含量超出健康人參考范圍,但不能用常規的方法檢測出這種微量的變化。為了使這一檢測指標標準化,上采用白蛋白分泌率表示尿中白蛋白的排出量。健康人MAU在<20~30mg/24h(或<20~30μg/min)的范圍內;MAU在20~300μg/24h時稱其為MAU;MAU>300mg/24h時稱其為大量白蛋白尿。MAU排出量增加是疾病早期的改變,對疾病的早期診斷,早期治療有重要的參考價值和臨床意義[1]。大量的臨床研究表明MAU是預測糖尿病、高血壓、心血管疾病血管損傷的敏感指標。目前上十分重視MAU的測定,認為這項指標對早期治療原發病、分析病程進展、評價相關危險因素具有重要意義[2]。本文分別用ELISA法和化學發光法測定尿微量白蛋白濃度,對其結果進行比較,并比較其優缺點,從而評價ELISA法的臨床適用性。

1 材料與方法
1.1 對象
115位患者,年齡在32~73歲之間平均(50.8±7.1)歲。都是臨床初步診斷疑為腎病、糖尿病、風濕病及心血管病等等不同類型的患者。
1.2 標本采集及處理
取每位患者的晨尿4~5ml于冰箱4~8℃保存,收集至115份標本之后,1周之內同時采用2種方法測定。
1.3 試劑與儀器人ELISA試劑盒
美國DPC公司生產的IMMULITE型全自動化學發光分析儀;ELX—800酶標儀(美國BIO-TEK);洗板機(BIO-RAD,MODEL1575)。
化學發光法試劑為:美國DPC公司生產的YZB/USA 2153-40 白蛋白試劑盒; ELISA法 :上海伊麗薩生物科技有限公司供應的 尿微量白蛋白ELISA試劑盒。
1.4 方法
1.4.1 人ELISA試劑盒化學發光法:嚴格按照美國DPC公司生產的 白蛋白試劑盒 操作手冊進行。
1.4.2 ELISA 法:嚴格按照尿微量白蛋白ELISA試劑盒的操作手冊進行。
1.4.3 測定分析:用上述兩種方法對上述115份患者尿標本微量白蛋白濃度進行測量,分別在ELX—800酶標儀上和全自動化學發光分析儀上直接讀取結果。
1.5 統計學檢驗:采用SPSS10.0統計軟件,檢測數據表示用x±s,組間數據比較用t檢驗,變量間的變化采用相關性分析。

2 結果
為了評價ELISA法測定尿微量白蛋白的準確性,我們采用雙盲的方法與化學發光法進行比較.收集115例病人尿樣分別使用ELISA方法和化學發光法進行測定, 化學發光法測定的平均值為10.39 mg/L,ELISA法測定的平均值為10.56mg/L,統計學線性回歸分析顯示相關系數r值為0.994。二者有較好的相關性.且P>0.05,即可以認為用ELISA測定的尿微量蛋白結果與化學發光測定結果沒有明顯差異。

3 討論
白蛋白是血漿白蛋白,由肝臟產生[3],分子量為66KD,半徑約為3.6nm,在血漿環境中帶負電荷,不易通過腎小球基底膜的孔徑屏障和電荷屏障,而原尿中的白蛋白在腎小管幾乎全部被重吸收,所以每日排出量僅10~30mg,常規干化學定量測定尿蛋白為陰性,故臨床習慣稱正常尿中無蛋白[4]。當腎臟發生早期損害時,由于腎小球毛細管滲透性和血管壁成分的改變,白蛋白可通過腎小球基底膜滲透到尿液中,尿中白蛋白排泄明顯高于正常,其濃度通常在20~200mg/L之間,于是形成了微量白蛋白尿[5]。通常用常規方法難以檢出,而當病變發展到尿常規蛋白測定結果為陽性時,腎臟的損傷往往已達到不可恢復的階段[6]。近年來許多研究表明尿微量白蛋白不僅是糖尿病腎病的預測指標,也是心血管疾病的獨立危險因素[7],所以檢測尿微量白蛋白有重要的臨床價值。本文分別用ELISA法和化學發光法測定尿微量白蛋白濃度,對其結果進行比較,并比較其優缺點,從而評價ELISA法的臨床適用性。
微量白蛋白尿的臨床應用廣泛,微量白蛋白尿是反映腎臟疾病和損傷的一個非常靈敏的指標,在預示糖尿病、腎病方面已使用多年。近年有資料顯示,微量白蛋白尿也是非糖尿病患者心血管疾病發病的一個危險因子,受到廣泛重視。
人ELISA試劑盒目前,已出現多種檢測尿中微量白蛋白的方法,如化學發光法、放射免疫法、試條半定量法、免疫比濁法等。因此,本文主要探討ELISA法檢測尿微量白蛋白的優缺點。化學發光法雖具有高靈敏度、高準確度、高精密度、寬線性、反應快速,影響因素少,結果準確等優點,但化學發光法的缺點是儀器、試劑成本高,給患者帶來的經濟負擔相對較重。而ELISA法設備簡單,易于開展,收費低廉,可用臨床普查,還具有簡便易行,不污染環境等優點。人ELISA試劑盒本文檢測結果與化學發光法同樣準確,差異無統計學意義(P>0.05),相關性良好(r=0.994),所以 ELISA法測定尿微量白蛋白具有經濟、實用的特點[8],因此ELISA法更適用于臨床,應得到普遍推廣。

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